ravo Stiff-Person Blot
Rekombinanter Immunoblot zum Nachweis von GAD65- und Amphiphysin-Autoantikörpern bei Stiff-Person-Syndrom
Das Stiff-Person Syndrom ist eine seltene neurologische Autoimmunerkrankung, die sich durch erhöhten Muskeltonus und Spasmen als Folge einer kontinuierlichen Aktivierung motorischer Einheiten auszeichnet. Antikörper gegen GAD (Glutamat-Decarboxylase) sind serologische Marker für ein Stiff-Person-Syndrom. Die Mehrheit der Patienten weist dabei hohe Titer gegen beide Isoformen, GAD65 und GAD67 auf. Diese Enzyme katalysieren die Umwandlung von Glutamat in GABA (γ-Aminobutter-säure), einem inhibitorischen Neurotransmitter des ZNS. Amphiphysin findet sich an synaptischen Vesikeln von Neuronen sowie im Skelettmuskel. Das Vorhandensein von anti-Amphiphysin Antikörpern (mit oder ohne GAD) weist auf eine Paraneoplasie als zugrundeliegende Erkrankung hin.
Bei positivem Nachweis von Amphiphysinantikörpern ist eine ausführliche Tumor-suche indiziert.
Kurze Beschreibung der Testdurchführung:
- Je einen Streifen mit der gebrauchsfertigen positiven und negativen Kontrolle versehen.
- Die übrigen Streifen mit 1,5 ml gebrauchsfertigem Probenpuffer überschichten und jeweils 15 µl Patientenserum zugeben
(Endverdünnung 1:100). Vorsichtig mischen.
- 60 Minuten bei Raumtemperatur auf einem Schüttler inkubieren.
- 5 mal Waschen mit gebrauchsfertigem Waschpuffer.
- Gebrauchsfertiges Konjugat (2ml) für die positive Kontrolle auf den entsprechenden Streifen pipettieren. Patientenproben und negative Kontrolle: pro Streifen 2 ml des gebrauchsfertigen Alkalische Phosphatase markierten anti-Human-IgG Konjugates pipettieren.
- 30 Minuten bei Raumtemperatur auf einem Schüttler inkubieren.
- 5 mal Waschen mit gebrauchsfertigem Waschpuffer.
- Pro Streifen 2 ml des gebrauchsfertigen Substrates (BCIP/NBT) pipettieren.
- 25 Minuten bei Raumtemperatur auf einem Schüttler inkubieren.
- Die Reaktion durch Spülen mit Aqua dest. stoppen. Die Streifen auf sauberem Filterpapier trocknen und auswerten. Die Streifen lichtgeschützt aufbewahren.